服务介绍
双荧光素酶报告系统（Dual-Luciferase Reporter Assay System）是一种用于定量检测基因转录活性的高效实验技术。该系统在同一细胞中同时表达两种荧光素酶：萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）作为报告基因，其表达水平受目标调控序列（启动子、3'UTR等）控制，直接反映该序列的转录活性；海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）由组成型启动子驱动，作为内参基因，用于校正转染效率、细胞数量和裂解效率等系统误差。
检测时，先加入荧光素（Luciferin）底物检测 Firefly 的黄绿色荧光（峰值约560nm），再加入含腔肠素（Coelenterazine）的终止液，同时淬灭 Firefly 荧光并激活 Renilla 的蓝白色荧光（峰值约480nm）。**终以 Firefly/Renilla 相对比值表示目标调控序列的转录活性，有效消除实验操作差异，结果准确可靠。
服务优势
质粒构建能力强
可完成启动子克隆、3'UTR克隆、定点突变、截短体构建等各类报告质粒，测序验证确保序列准确。
内参校正严谨
严格采用Firefly/Renilla双荧光比值定量，有效消除转染效率、细胞数等系统误差，结果准确。
对照设置完整
每例实验均设置空白对照、阴性对照、阳性对照及复孔，复孔CV值小于15%，确保结果可靠。
交付内容完整
提供原始荧光数据、归一化分析结果、统计学分析及详细实验报告，可直接用于论文发表。
服务流程
接收质粒/细胞样品
测序验证序列
共转染目标细胞
被动裂解液裂解
Renilla荧光检测
实验报告交付
客户提供
样品与材料要求
质粒样品：如需客户提供报告质粒，需提供经测序验证的正确质粒，浓度≥100ng/μL，总量≥10μg，干冰或冰袋运输。也可委托我司进行质粒构建。
细胞样品：
▶ 需提供目标细胞系，细胞状态良好，无污染；▶ 如为难转染细胞（原代细胞、悬浮细胞等），请提前说明，以便优化转染条件；▶ 细胞运输：活细胞培养瓶常温运输，或冻存细胞干冰运输。处理因素：如涉及药物处理、基因过表达/敲低等，需提供药物或相关质粒/病毒，并说明处理浓度和时间。
实验信息：需提供目标基因名称、ID号、序列信息（如已知）、实验目的（启动子分析/miRNA验证/通路研究）及预期分组。
服务说明
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
|---|---|---|---|
| 启动子活性分析 | 报告质粒构建 | 启动子序列克隆至Firefly报告载体，测序验证 | 10-15 |
| 内参质粒共转染 | 报告质粒+Renilla内参质粒共转染，设3复孔 | ||
| 双荧光素酶检测 | Firefly及Renilla荧光检测，原始数据 | ||
| 数据分析 | Firefly/Renilla比值计算、归一化分析、统计图表 | ||
| miRNA靶基因验证 | 3'UTR报告质粒构建 | 靶基因3'UTR野生型及结合位点突变型质粒构建，测序验证 | 12-18 |
| miRNA共转染 | 报告质粒+miRNA mimic/inhibitor+内参质粒共转染，设3复孔 | ||
| 双荧光素酶检测 | Firefly及Renilla荧光检测，原始数据 | ||
| 野生型/突变型对照 | 同时检测野生型及突变型报告质粒，验证结合特异性 | ||
| 数据分析 | 相对荧光比值计算、统计学分析、结果图表 | ||
| 信号通路研究 | 通路报告质粒 | 提供NF-κB、Wnt/TCF、AP-1、SBE等常用通路报告质粒 | 8-12 |
| 药物/基因处理 | 按实验方案进行药物处理或基因过表达/敲低 | ||
| 双荧光素酶检测 | Firefly及Renilla荧光检测，原始数据 | ||
| 数据分析 | 通路活性相对比值计算、剂量/时间曲线、统计图表 |