服务介绍
免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法。其基本原理是：在非变性条件下裂解细胞或组织，保持蛋白复合物的天然构象，加入针对靶蛋白 A 的特异性抗体，抗体与靶蛋白 A 结合后，通过 Protein A/G 磁珠（或琼脂糖珠）捕获抗体-蛋白复合物，与靶蛋白 A 结合的互作蛋白 B 也随复合物一起被沉淀富集。经过充分洗涤去除非特异性结合蛋白后，洗脱沉淀复合物，通过 Western Blot 或质谱检测互作蛋白的存在。
Co-IP 技术的核心优势在于能够在接近生理状态的条件下反映蛋白间的真实相互作用，可研究复杂的蛋白质复合物（包括多个亚基或较大的蛋白质复合物），并提供定性和定量信息。实验必须设置 Input（阳性对照）、IP（实验组）和 IgG（阴性对照）三组对照，以确保结果的可靠性。
图：Co-IP 免疫共沉淀实验原理与操作流程
服务优势
🔬
生理条件下检测
非变性裂解保持蛋白复合物天然构象，更接近细胞内真实环境，揭示生物体内的相互作用。
🧩
复合物完整鉴定
可研究复杂蛋白质复合物，包括多个亚基或较大的蛋白复合物，一次性捕获全部互作蛋白。
✅
对照设置严谨
每例实验均设置Input、IP、IgG三组对照，有效排除非特异性结合，确保结果可靠。
📊
交付内容完整
提供原始WB图片、定量分析数据及详细实验报告，CoIP-MS额外提供质谱鉴定结果，可直接用于论文发表。
服务流程
1
接收订单及样品
确认实验方案
接收细胞/组织样品
接收细胞/组织样品
2
样品裂解与定量
非变性裂解液裂解
BCA蛋白定量
BCA蛋白定量
3
抗体与磁珠孵育
一抗与样品孵育
Protein A/G磁珠结合
Protein A/G磁珠结合
4
沉淀收集与洗涤
磁分离收集复合物
洗涤3-5次去杂蛋白
洗涤3-5次去杂蛋白
5
WB检测或质谱
SDS-PAGE电泳
WB检测或质谱鉴定
WB检测或质谱鉴定
6
结果交付
原始数据+分析结果
实验报告交付
实验报告交付
客户提供
样品与材料要求
抗体要求：诱饵抗体需为 IP 级别抗体，抗体量 ≥ 30μL/次；CoIP-WB 猎物抗体 10μL/次（分装管需提供抗体说明书或品牌货号）。也可委托我司代购抗体。
细胞样品：
▶ 细胞量 ≥ 3×10⁷ 个细胞，离心后收集细胞沉淀，沉淀体积约为 80-100μL；▶ 干冰运输，避免反复冻融。组织样品：
▶ 动物组织不少于 0.5g；植物组织不少于 1g，新鲜幼嫩组织；▶ 离体后迅速超低温处理并 -80℃ 冻存的组织样品，干冰运输。实验信息：需提供靶蛋白名称、ID号、抗体信息（如自备）、实验目的及预期分组。
服务说明
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
|---|---|---|---|
| CoIP-WB | 蛋白提取 | 1个样本，非变性裂解液提取总蛋白，BCA定量 | 16 |
| IP前检测 | WB检测1个诱饵蛋白和1个猎物蛋白的表达 | ||
| Co-IP | 对照组和实验组各IP一次，含Input、IP、IgG对照 | ||
| IP后检测 | WB检测1个诱饵和1个猎物的实验后对照组、实验组、input组 | ||
| CoIP-MS | 蛋白提取 | 1个样本，非变性裂解液提取总蛋白，BCA定量 | 31 |
| IP前检测 | WB检测1个诱饵蛋白的表达 | ||
| Co-IP | 对照组和实验组各IP一次，含Input、IP、IgG对照 | ||
| IP后检测 | WB检测1个诱饵的实验后对照组、实验组、input组 | ||
| 质谱鉴定 | 含银染及2组（实验组和对照组）质谱鉴定分析，提供互作蛋白列表 |
案例展示
Aberrant oligodendroglial LDL receptor orchestrates demyelination in chronic cerebral ischemia
研究通过 Co-IP 实验验证了低密度脂蛋白受体（LDLR）与衔接蛋白 Shc 在脑缺血慢性期的相互作用。使用 anti-LDLR 抗体对脑胼胝体组织裂解液进行免疫沉淀，Western Blot 检测发现 IP 组中可检测到 Shc 蛋白，而 IgG 对照组无明显条带，证明 LDLR 与 Shc 存在特异性结合。该相互作用通过激活下游 MEK/ERK 信号通路，参与慢性脑缺血后的脱髓鞘过程。
E3泛素连接酶TRIM25通过泛素化修饰调控抗病毒天然免疫信号通路
利用 Co-IP 结合质谱（CoIP-MS）技术，鉴定了 E3 泛素连接酶 TRIM25 的新型互作蛋白。通过 anti-TRIM25 抗体免疫沉淀细胞裂解液，对沉淀复合物进行质谱分析，发现并验证了 TRIM25 与天然免疫关键分子 RIG-I 的 CARD 结构域存在直接相互作用。进一步的 CoIP-WB 验证显示，TRIM25 通过 K63 连接的泛素化修饰增强 RIG-I 的活性，从而正向调控抗病毒天然免疫应答。
Q&A 常见问题
Co-IP 与 GST pull-down 有什么区别？该如何选择？
Co-IP 是在非变性条件下裂解细胞，利用内源性蛋白的抗体进行沉淀，反映的是细胞内接近生理状态的蛋白相互作用（体内验证）。GST pull-down 是利用体外表达纯化的 GST 融合蛋白与细胞裂解液或纯化蛋白孵育，属于体外互作验证。一般建议先用 GST pull-down 做体外初筛，再用 Co-IP 做体内验证，两者结合结果更有说服力。
为什么我的 Co-IP 实验 IgG 对照组也有条带（假阳性）？
IgG 对照组出现条带通常提示存在非特异性结合，可能原因包括：抗体特异性差、洗涤不充分、蛋白与磁珠或抗体的非特异吸附、裂解液盐浓度过低等。解决方法：增加洗涤次数（至5次）、提高洗涤液中 NaCl 浓度（至300-500mM）、更换特异性更好的抗体、增加预清除步骤。
Co-IP 实验 Input 没有条带是什么原因？
Input 没有条带说明靶蛋白或互作蛋白在样本中表达量极低，或抗体不适合 WB 检测。可能原因包括：蛋白本身表达量低、样本处理不当导致蛋白降解、抗体不识别变性蛋白（仅适用于免疫荧光等非变性应用）。建议：优化样本制备、增加上样量、更换经 WB 验证的抗体、或改用 qPCR 确认mRNA 水平表达。
所有抗体都可以用于 Co-IP 实验吗？
不是。Co-IP 需要抗体能够识别非变性条件下蛋白的天然表位，因此必须选择经 IP 验证（IP-validated）的抗体。很多抗体只能识别变性蛋白（适用于 WB），在非变性条件下无法结合靶蛋白，不适合 Co-IP。多克隆抗体通常比单克隆抗体更适合 IP（识别多个表位）。建议查阅抗体说明书或文献确认其 IP 适用性。
CoIP-WB 和 CoIP-MS 有什么区别？分别适用于什么场景？
CoIP-WB 是在免疫沉淀后用 Western Blot 检测已知的候选互作蛋白，适用于已有明确候选蛋白、需要验证特定蛋白间相互作用的场景，周期较短（约16个工作日）。CoIP-MS 是在免疫沉淀后用质谱鉴定沉淀复合物中的所有蛋白，可发现未知的新型互作蛋白，适用于互作蛋白筛选、蛋白复合物组成鉴定等探索性研究，周期较长（约31个工作日），费用也更高。